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1、三羟乙基芦丁对大鼠颈脊髓损伤的抗氧化应激作用

文题释义：

氧化应激：是体内氧化与抗氧化作用的失衡状态，倾向于氧化，自由基在体内产生负面作用，产生大量氧化中间产物，是导致衰老和疾病的重要因素。

三羟乙基芦丁：是一种黄酮类化合物，分子式为C33H42O19，是在芦丁C27H30O16分子结构基础上添加了3个羟乙基亲水基团，更加容易被机体吸收利用，显著提高了生物学效应。

信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription，STAT)：是脱氧核糖核酸结合蛋白的家族，在信号转导和基因转录激活中发挥关键作用，包括STAT1，2，3，4，5A，5B等7个成员，通过抑制STAT3可发挥明显的抗氧化应激作用，降低脊髓损伤的程度。

背景：既往动物实验研究发现三羟乙基芦丁可改善颈脊髓损伤大鼠的神经功能，但缺乏其作用机制的相关研究。

目的：通过体内体外实验研究三羟乙基芦丁对颈脊髓损伤的抗氧化应激作用，并对其可能机制进行初步探讨。

方法：①细胞实验：大鼠肾上腺PC12细胞购于美国模式菌种收集中心(ATCC)细胞库。MTT法检测梯度浓度(0，25，75，100，150，200，250 μmol/L)叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide，TBHP)、梯度浓度三羟乙基芦丁(0，50，100，200，400 μmol/L)对PC12细胞活性的影响，确定TBHP和三羟乙基芦丁的实验浓度。②动物实验：将雄性SD大鼠分为假手术组、损伤组、三羟乙基芦丁50 mg/kg 组、三羟乙基芦丁100 mg/kg组、STAT3抑制剂组，每组12只。除假手术组外行大鼠颈脊髓损伤，三羟乙基芦丁50 mg/kg组和100 mg/kg组损伤造模后分别予以腹腔注射三羟乙基芦丁50 mg/kg(1次/d)和100 mg/kg(1次/d)；抑制剂组在损伤造模后给予STAT3抑制剂 2 000 µg/kg(1次/d)；假手术组动物行椎板切除术，但未行挫伤打击操作。假手术组和损伤组大鼠予以腹腔注射生理盐水，连续注射3 d。采用DCFH荧光探针检测三羟乙基芦丁对TBHP刺激PC12细胞中活性氧合成的影响；采用Western blot方法检测三羟乙基芦丁和STAT3抑制剂对PC12细胞及颈脊髓损伤组织中氧化应激相关蛋白Catalase和锰超氧化物歧化酶表达水平的影响；免疫荧光染色检测三羟乙基芦丁对颈脊髓损伤组织中STAT3和锰超氧化物歧化酶蛋白表达的影响。

结果与结论：①三羟乙基芦丁可显著降低由TBHP诱导的PC12细胞内活性氧形成(P < 0.05)；②三羟乙基芦丁和STAT3抑制剂可显著上调PC12细胞和颈脊髓损伤组织内的Catalase蛋白和锰超氧化物歧化酶蛋白的表达量(P < 0.05)，同时显著抑制STAT3和NCK1蛋白表达量(P < 0.05)；③三羟乙基芦丁具有抗氧化应激作用，可降低脊髓损伤后氧化应激的破坏作用，其机制可能是通过调节STAT3的表达起效。

缩略语：嗜铬细胞瘤细胞：pheochromocytoma cells，PC12；叔丁基过氧化氢：tert-butyl hydroperoxide，TBHP；信号转导和转录激活因子：signal transducer and activator of transcription，STAT

https://orcid.org/0000-0001-9954-4785 (刘雅普)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：人工关节；骨植入物；脊柱；骨折；内固定；数字化骨科；组织工程

关键词:三羟乙基芦丁, 颈脊髓损伤, 大鼠, 氧化应激, STAT3

引用本文:刘雅普, 苏圆圆, 刘 祺, 杨 舟, 李 榕, 黄祖成, 黄志平, 吴晓亮, 朱青安. 三羟乙基芦丁对大鼠颈脊髓损伤的抗氧化应激作用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(36): 5868-5874.

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三羟乙基芦丁对大鼠颈脊髓损伤的抗氧化应激作用

2、叔丁基过氧化氢的理化常数

叔丁基过氧化氢的理化常数

叔丁基过氧化氢(过氧化叔丁基，TBHP)
CAS号: 75-91-2
分子式： C4H10O2
结构式：(CH3)3COOH
分子量： 90.12
质量指标：
外观 淡黄色有刺激性气味透明液体 ，水分含量15%-30%
叔丁基过氧化氢含量 ≥70.0%
铁(Fe） ≤0.0003%
比重(20/4°C) -0.92
色度(铂-钴色号) ≤60
沸点 111°C
二叔丁基过氧化物 ≤0.08%
叔丁醇 ≤0.5%
凝固点 -3℃
半衰期:1min(264℃)、0.1h(207℃)、1h(185℃)、10h(164℃)、12h(120℃)
理论活性氧含量 17.75%
活化能 186.0lkJ/mol
闪点 26.7℃
酮 ≤0.18%
其他氧化物 ≤1.0%
其他有机物 ≤0.4%
理论活性氧含量 17.75%
半衰期分解温度 264°C(1分钟),172(10小时)
用途： 乳化聚合，天然生胶加硫，改进柴油燃料的十六烷值，过氧化叔丁基团引入剂，也作不饱和聚酯的中温和高温用作交联剂。用作厌氧胶和快固丙烯酸酯结构胶的引发剂。也用作聚合反应(丙烯酸乳液聚合单体后消除)的引发剂。
包装：净重180Kg，200L高密度聚乙烯桶。
储运： 储存于阴凉、低温、通风良好的不燃材料结构仓库。远离热源和明火。防止日光直射。与还原剂、促进剂、有机物、可燃物及强酸隔离储运。

叔丁基怎么转化成叔丁基过氧化氢

一、异丁烯双氧水法

该合成法也是Milas和Mass于1940年在美国专利中公开的TBHP制备方法，它是以异丁烯、70％硫酸和30％双氧水为原料，先将异丁烯与过量70％硫酸反应得到叔丁醇硫酸氢酯，硫酸氢酯再与双氧水反应脱硫酸得到TBHP。

可以看出，与叔丁醇硫酸法相比，该合成法有以下缺点：硫酸和双氧水用量太大，都是异丁烯摩尔数的两倍，两步反应都需要低温条件，原料异丁烯是气体物质，储存输送不方便，还有尾气吸收问题，另外粗产物中TBHP含量不高也限制了它的工业应用。

象异丙苯一样，异丁烷分子中的叔碳氢很活泼，在溴化氢或自由基引发剂的存在下，由自由基引发剂受热分解产生活性自由基夺取异丁烷分子中的叔碳氢，生成叔丁基自由基，其与氧分子反应生成叔丁基过氧自由基，它立即夺取异丁烷子中的叔碳氢形成叔丁基过氧化氢和叔丁基自

格氏试剂合成法是Wailing和Montclair于1957年在美国专利中公开的叔丁基过氧化氢制备新方法，它是将氯代叔丁烷和镁粉反应先制得格氏试剂叔丁基氯化镁，在极低温度下，然后在乙醚溶剂中与过量氧气反应，得到叔丁基过氧基氯化镁，最后在强酸存在下水解得到叔丁基过氧化氢。

过氧化氢二叔丁基的应急处理处置方法

一、泄漏应急处理
迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿消防防护服。不要直接接触泄漏物。尽可能切断泄漏源，防止进入下水道、排洪沟等限制性空间。小量泄漏：用惰性、潮湿的不燃材料混合吸收。收入塑料桶内。也可以用不燃性分散剂制成的乳液刷洗，洗液稀释后放入废水系统。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容；用泡沫覆盖，降低蒸气灾害。用防爆泵转移至槽车或专用收集器内，收集回收或运至废物处理场所处置。
二、防护措施
呼吸系统防护：可能接触其蒸气时，应该佩戴过滤式防毒面具(半面罩)。
眼睛防护：戴化学安全防护眼镜。
身体防护：穿聚乙烯防毒服。
手防护：戴橡胶手套。
其它：工作现场严禁吸烟。保持良好的卫生习惯。
三、急救措施
皮肤接触：脱去被污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。
眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。
吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。
食入：饮足量温水，催吐。就医。
四、灭火方法
消防人员须在有防爆掩蔽处操作。灭火剂：水、泡沫、二氧化碳、砂土。遇大火切勿轻易接近。在物料附近失火，须用水保持容器冷却。

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